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当生物偏光显微镜抗原为糖蛋白时,使用PLP固定液对细胞结构保存与抗原活性保存均可收到很好效果。偏光显微镜某些抗原如果用上面两种固定液保存效果都不理想,生物显微镜可试用不含戊二醛的4%甲醛固定液(如S-100酸性蛋白);如果显微镜价格抗原能够耐受较高浓度的戊二醛(2%)和四氧化俄(1写)固定,如促黄体激素,生长激素,催乳激素等,显微镜则可用常规电镜方法中的固定液。
总之,生物显微镜免疫电镜中的固定液要依所研究的抗原而定,并无常规可以遵循。对于一个对固定剂耐受能力不明的抗原,显微镜最好经过预实验来确定其固定液成份。例如,可以设计一系列固定液,偏光显微镜,尼康显微镜,数码显微镜,偏光显微镜,徕卡显微镜等等。其中分别含有4%甲醛,4%甲醛加0.05%戊二醛,4%甲醛加0.1%戊二醛,4纬甲醛加0.5%戊二醛,用它们固定祥品后制备冰冻切片,生物显微镜在冰冻切片上用免疫荧光法或免疫金银法观察标记情况,生物显微镜以判断何种固定液适合此种抗原。
透射电镜下的免疫电镜样品x要包埋,以便制备超薄切片。免疫电镜的包埋材料除了应当满足一般包埋剂的要求(适当的硬度和塑性,显微镜收缩率低,无结构,在电子束轰击下稳定等)外,还应能使抗原活性得到保存。现将几种常用包埋剂介绍如下。
环氧树脂易于获得,生物偏光显微镜使用方便,可用于免疫电镜中的包埋前法。生物显微镜当用于包埋后法时,生物显微镜则仅适用少部分抗原。显微镜这是因为,环氧树脂中的环氧基十分活泼,能与抗原分子中的很多基团,如一OH,一SH,一NH, >NHH等发生反应,从而使抗原失活.其次,环氧树脂聚合时,需加温至(6O- 8o) *C,这一温度下会使很多抗原分子变性。最后,环氧树脂是一疏水材料,即使生物偏光显微镜那些未与环氧基发生反应并在聚合加温中幸免变性的杭原分子,偏光显微镜在超薄切片上也处在一疏水环境中,生物显微镜使水溶性的免疫标记试剂难以与之接近,而不能成功的进行标记。显微镜这些缺点都限制了环氧树脂在免疫电镜中的应用。
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